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  • 雙抗原競爭免疫層析原理
    更新日期:2022-09-01     瀏覽次數:31
    核心提示:2.1牛IgG的提取取60 mL牛血清,攪拌滴加醋酸鈉溶液,調節pH至4.5;滴加正辛酸溶液,常溫攪拌均勻后,4 ℃放置1 h;12000 r/min離心30 min,上清經濾紙

    2.1牛IgG的提取

    取60 mL牛血清,攪拌滴加醋酸鈉溶液,調節pH至4.5;滴加正辛酸溶液,常溫攪拌均勻后,4 ℃放置1 h;12000 r/min離心30 min,上清經濾紙過濾后,加入1/10體積的10×PBS,調節pH至7.0,攪拌滴加飽和硫酸銨溶液至50%,4 ℃放置2 h,12000 r/min離心30 min,去上清;PBS重懸離心后的沉淀物,4 ℃透析,每2 h更換一次透析液,直至完全去除氨離子;檢測蛋白濃度,凍存,備用。

    2.2兔抗牛IgG抗體的制備

    用制備好的牛IgG抗原每2周免疫1次大耳白兔,經4次免疫后,取耳緣靜脈血進行酶聯免疫吸附實驗檢測抗體效價,效價達到10萬后停止免疫,進行頸動脈采血。將兔血經5000 r/min,4 ℃離心15 min后收集上層血清。提取抗體,提取方法同牛IgG提取方法。測定抗體效價及濃度,凍存,備用。

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